К иммунокомпетентным клеткам относят лимфоциты и макрофаги (моноциты и тканевые макрофаги). По своему происхождению и функциям лимфоциты подразделяют на Т-клетки (тимусзависимые) и В-клетки (формирующиеся в костном мозге и лимфоидных тканях). В популяции Т-лимфоцитов по функциональному предназначению различают следующие субпопуляции: киллеры («клетки-убийцы», разрушители антигенов), хелперы (помощники — регуляторы иммуногенеза), супрессоры (подавляют избыточную активность Т- и В-клеток). Основной функцией В-лимфоцитов является продуцирование АТ.
Определение количества Т-лимфоцитов основано на их свойстве образовывать комплекс (так называемую розетку) с эритроцитами (Е) барана. Поэтому Т-лимфоциты называют Е-розеткообразующими клетками (Е-РОК). Методика выделения Е-РОК предусматривает проведение инкубации. Если же лимфоциты без инкубации активно соединяются с эритроцитами барана, то их характеризуют как Т-«активные» клетки (Еа-РОК). Помимо этих субпопуляций, различают теофиллинчувствительные и теофиллинрезистентные лимфоциты. Теофиллинчувствительные лимфоциты—это лимфоциты, не взаимодействующие с эритроцитами барана в присутствии теофиллина.
Это явление связано с наличием на поверхности Т-супрессоров рецепторов, блокируемых теофиллином, поэтому комплексы с эритроцитами не образуются. Т-хелперы аналогичных рецепторов не имеют и обозначаются как теофиллинрезистентные лимфоциты. Для популяции В-лимфоцитов (ЕАС-РОК) характерно образование комплексов с эритроцитами мыши. При использовании данного метода считается нормальным содержанием в крови: Т-лимфоцитов—(58,6 ± 1,7)% (40—67%), «активных» Т-лимфоцитов — 22—39% (30,8 ± 1,1%), В-лимфоцитов — 16—86% (26,0 + 1,2%), а соотношение Т-супрессоров и Т-хелперов в норме равно 1:3.
В настоящее время одним из ключевых направлений работы иммунологической лаборатории является иммунофенотипирование лимфоцитов. Для этого применяются проточная цитометрия, иммунофлюоресцентный, иммуноцитохимический и лимфоцитотоксический методы. Иммунокомпетентные клетки, в частности лимфоциты, несут на своей мембране поверхностные маркеры — кластеры дифференцировки (CD — Cluster of Differentiaton), отражающие фенотип клеток. Согласно современным стандартам, существует оптимальный объем популяций и субпопуляций лимфоцитов для оценки иммунного статуса.
Основные маркеры CD для оценки иммунного статуса
| Маркер | Популяция клеток |
| CD3 | Т-лимфоциты |
| CD4 | Т-хелперы |
| CDS | Цитотоксические Т-лимфоциты |
| CD19 | В-лимфоциты |
| CD20 | В-лимфоциты |
| CD16 | Естественные киллеры, некоторые лимфоциты |
| CD56 | Естественные киллеры |
| CD25 | Нерастворимый рецептор IL2; "ранний" маркер активации |
| HLA-Dr | В-лимфоциты, моноциты, активированные Т-лимфоциты |
Однако при диагностике лимфопролиферативных заболеваний перечень маркеров СО, необходимых для адекватного иммунофенотипирования, существенно возрастает. Нормальные показатели CD-маркеров лимфоцитов представлены в таблице:
| CD-маркеры лимфоцитов | х109/л | % |
| CD-3 | 60-80 | 1,0-2,4 |
| CD-4 | 33-50 | 0,6-1,7 |
| CD-8 | 16-39 | 0,3-1,0 |
| CD-4/CD-8 | 1,5-2,0 | |
| CD-19 | 5-22 | 0,04-0,4 |
| CD-20 | 6-23 | 0,05-0,6 |
| CD-16 | 3-20 | 0,03-0,5 |
| CD-56 | 5-25 | 0,045-0,7 |
| CD-25 | 7-18 | 0,06-0,4 |
| HLA-Dr | 9-28 | 0,1-0,75 |
Помимо исследования количественных параметров, крайне важно оценить функциональную активность иммуноцитов. Наиболее распространенным методом оценки Т-системы является РТМЛ. Метод основан на способности сенсибилизированных лимфоцитов под влиянием антигена in vitro выделять биологически активные субстанции (лимфокины), одним из свойств которых является торможение миграции лейкоцитов по капилляру. В качестве антигена используют митогены растительного происхождения ФГА или КонА, а также различные аллергены, применяемые для внутрикожных проб. Для диагностики наличия антинуклеарных антител применяют РТМЛ с нативной ДНК. Результаты РТМЛ с ФГА и КонА отражают косвенным образом общую функциональную активность Т-клеток, а применение аллергенов или тканевых антигенов позволяет оценить специфическую сенсибилизацию к таковым. В норме РТМЛ с ФГА должна быть (40,5 ± 1,8)% (20—60%), а с КонА —(69,1 ± 1,7)% (40—76%).